O isolamento do DNA e/ou RNA consiste no primeiro passo dos experimentos em biologia. Existem muitos e diferentes protocolos de extração de ácidos nucleicos; vários fazem uso de Fenol e solventes orgânicos como o Clorofórmio, que são tóxicos e cujo o uso deve ser evitado em atividades de classe.
Em células eucarióticas a maior parte do DNA está localizada no núcleo. Para a extração de DNA é necessário o rompimento da membrana plasmática. Uma vez rompidas as membranas, o conteúdo celular extravasa ficando em suspensão.
Bom, hoje fomos para o laboratório de Biologia e lá realizamos três procedimentos estudando Membrana Plasmática, Osmose e DNA. Na prática envolvendo DNA realizamos os seguintes procedimentos:
- Fizemos uma solução de Lise (detergente + sal + água),
- Colocamos o material biológico (película da cebola) em um tubo de microcentrífuga de 1,5 mL,
- Adicionamos 0,5 mL da solução de Lise em cada tubo com a amostra e homogeneíze com um bastão
-Deixamos o tubo com o homogeneizado em banho-maria com temperatura próxima de 60° C,
-Centrifugamos os tubos por 5 minutos e transferimos com cuidado o sobrenadante para um tubo líquido
-Precipite os ácidos nucleicos adicionando dois volumes de etanol gelado. Delicadamente, inverta várias vezes o tubo até que os ácidos nucleicos precipitem totalmente. A precipitação dos ácidos pode ser observado sob a forma de "fiapos" esbranquiçados ou incolores.
-Centrifugue novamente por um minuto para que os ácidos nucleicos precipitem no fundo do tubo. Retire toda a parte líquida, deixando somente os ácidos nucleicos que ficam aderidos no fundo do tubo.
-Deixe o tubo aberto até o ar secar por alguns minutos e o álcool evaporar
- Para melhor armazenar, adicione 0,1 mL de água no tubo.
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| Banho-Maria |
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| Centrífuga |
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| Ácidos Nucleicos |
Catalão, 18 de Novembro de 2014.
Nátaly Rodovalho e Letícia de Oliveira
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